کرایوپرزرویشن سلول های اپی تلیال آمنیون انسانی در محیط فاقد سرم

مقدمه و هدف: از مباحث مطرح در نگهداری طولانی مدت سلول ها، حذف سرم حیوانی از محیط های نگهداری است. در این مطالعه از مایع آمنیون که سرشار از فاکتور های رشد و مواد غذایی است به عنوان جایگزین سرم حیوانی استفاده شد و اثرات استفاده از آن در تعداد سلول های زنده و پرتوانی سلول ها پس از کرایوپرزرویشن ( نگهداری به روش انجماد) بررسی گردید. روش کار: در این مطالعه تجربی پس از تهیه پرده آمنیون و کنترل میکروبی آن، سلول های اپی تلیال آمنیون انسانی جداسازی گردید. سلول ها در 24 حالت مختلف در دمای c°196- در نیتروژن مایع به مدت 12 ماه نگهداری شدند و درصد سلول های زنده قبل و پس از نگهداری به روش انجماد با روش های تریپان بلو و mtt ارزیابی و بیان مارکر oct-4 به منظور بررسی پرتوانی سلول ها قبل و بعد از نگهداری به روش انجماد با روش ایمونوسیتوشیمی بررسی شدند. نتایج حاصل در بین گروه ها با روش anova مقایسه شد (tukey post-test). تفاوت بین نمونه ها در دوسطح p<0.05 و p<0.01 بررسی گردید. نتایج: یافته های حاصل نشان داد که وجود dmem، fbs و یا مایع آمنیوتیک (بجای fbs) برای نگهداری بهینه سلولها به روش انجماد ضروری است. تعداد سلول های زنده و درصد بیان oct-4 در مواردی که مایع آمنیون به جای سرم استفاده شده بود تغییر معنی داری نداشت. همچنین یافته ها نشان داد که dmso نسبت به گلیسرول ، ماده محافظ بهتری برای نگهداری سلول های اپی تلیال آمنیونی می باشد. نتیجه نهایی: نتایج این مطالعه نشان می دهد که مایع آمنیون می تواند به عنوان جایگزین مناسب برای سرم حیوانی در نگهداری به روش انجماد سلول های اپی تلیال آمنیون انسانی استفاده شود.